冰凍切片是將新鮮樣品立即在液態(tài)氮或其他制冷劑中直接冰凍或者經(jīng)化學(xué)固定后的樣品再冰凍，置于低溫下迅速凍結(jié)達(dá)到一定的硬度后直接進(jìn)行切片的一種方法。目前，冰凍切片主要用于臨床病理快速診斷和部分形態(tài)學(xué)研究性工作中。

了解冰凍切片的原理可以更好地運用在臨床病理取材中，也便于在臨床教學(xué)中更好地學(xué)習(xí)與實踐。本文就冰凍切片的原理和其優(yōu)缺點進(jìn)行簡單的闡述。

冰凍切片的原理

組織經(jīng)過冷凍后，其內(nèi)的水分結(jié)冰，起到了包埋劑的作用，使組織變硬，有利于切成薄片。其過程比較簡單，無需經(jīng)過脫水和透明步驟，組織經(jīng)固定或不固定都可切片，一般亦可切成幾微米的薄片。由于組織不經(jīng)溶劑處理，不受試劑的強(qiáng)烈刺激及溫度的影響，所以組織沒有顯著的收縮，細(xì)胞形態(tài)沒有大的改變，脂肪和類脂也能較好保存。這樣，冰凍切片除了對外科手術(shù)中的快速診斷十分有意義外，在組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)、免疫定位、原位雜交、酶定位及植物微管研究中也被廣泛地應(yīng)用。

和其他幾種切片方法相比，冰凍切片有著*的*性，但也有一定的局限性。

優(yōu)點

1)簡便，快速，用時短。在臨床上，手術(shù)的摘出物需急速診斷時，用此法從采取標(biāo)本到切片制成，可以在15min之內(nèi)完成。切片前可以不需要對組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)即可進(jìn)行切片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。

2)組織變化不大。能較好地保存脂肪、類脂等成分；在免疫組織化學(xué)研究中有利于組織抗原性的保存；有些研究為了保存某些酶的活性也需要采用此法。特別是對于那些對有機(jī)溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細(xì)胞膜表面抗原和水解酶保存較好。

缺點

1)不容易做連續(xù)切片和較薄的切片。

2)組織塊在凍結(jié)過程中產(chǎn)生的冰晶影響細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及抗原物質(zhì)的定位。組織結(jié)構(gòu)不如石蠟切片好，切片較厚、不易得到很好的連續(xù)切片，且操作時容易破碎(易破碎的樣品在冰凍前可用10％明膠或2％瓊脂糖包埋)。由于組織內(nèi)的水份起到包埋劑的作用，在組織冰凍的過程中，一旦冰晶的核心形成，它們就逐漸膨脹，并破壞所有圍繞它們的細(xì)胞器。當(dāng)冰凍的組織切片貼到玻片上時，冰晶融化，在組織上留下許多孔狀的空隙。由于水在-4℃時體積大，組織內(nèi)形成冰晶的數(shù)量則與組織冷凍的速度成反比，因此，要盡量避免緩慢的冷卻。使組織的溫度迅速降到-4℃以下，而且送檢做冰凍切片的組織應(yīng)盡可能地新鮮和避免過度的潮濕。用濕的鹽水紗布包裹組織會使切片出現(xiàn)嚴(yán)重的人為假像及大量的冰晶孔隙，不僅造成診斷的困難，也使各種特殊要求的染色難以進(jìn)行。

在臨床實踐中，結(jié)合需要，選擇合適的切片方法，提高診斷的準(zhǔn)確性顯得尤為重要。